醫(yī)院感染消毒滅菌效果監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)及方法
根據(jù)2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》的要求，現(xiàn)將我院消毒滅菌效果監(jiān)測、環(huán)境微生學(xué)監(jiān)測的采樣方法、結(jié)果判定、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)等規(guī)范如下：
環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測：包括空氣、物體表面、醫(yī)務(wù)人員手的監(jiān)測
采樣及檢查原則：采樣應(yīng)具有一定數(shù)量和代表性，采樣后**盡快對樣品按要求指標(biāo)進(jìn)行檢測，送檢時間不得﹥6小時，若樣品保存在冰箱內(nèi)送檢時間不得﹥24小時。
醫(yī)院室內(nèi)空氣的消毒
I 類環(huán)境：包括層流潔凈手術(shù)室和層流潔凈病房，要求空氣中的細(xì)菌總數(shù)≤10 cfu/m3。
II 類環(huán)境：包括普通手術(shù)室、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室潔凈區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房。要求空氣中的細(xì)菌總數(shù)≤200 cfu/m3。
III類環(huán)境：包括兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急診室、化驗(yàn)室、各類普通病室和房間，要求空氣中的細(xì)菌總數(shù)≤500 cfu/m3。
1、 采樣時間：消毒處理后，操作前進(jìn)行采樣。
2、采樣方法：平板暴露法
（1）布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積≤30 m2;，設(shè)內(nèi)、中、外對角線3點(diǎn)，內(nèi)外兩點(diǎn)距墻1米；室內(nèi)面積＞30 m2，設(shè)東、西、南、北4角及中央5點(diǎn)，其中東、西、南、北均距墻1米。
（2）采樣方法：將直徑為9cm普通營養(yǎng)瓊脂平板放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度為距地面1.5米，采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露5分鐘，蓋好立即送檢。
3、計(jì)算公式：
空氣細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/ m3）=50000N∕（A × T）
式中A為平板面積（cm2）；T為平板暴露時間（min）；N為平均菌落數(shù)（cfu）。平板面積：半徑2× π （π即3.14） 那么此公式可以簡化為N×157。
4、注意事項(xiàng)：采樣前，關(guān)好門、窗，在無人走動的情況下，靜止10min 進(jìn)行采樣。
5、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（結(jié)果判定）：
Ⅰ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu∕m3 (或0.2cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；
Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤200cfu∕m3 (或4cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；
Ⅲ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤500cfu∕m3 (或10cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。
物體和環(huán)境表面消毒
I 類環(huán)境：包括層流潔凈手術(shù)室和層流潔凈病房。
II 類環(huán)境：包括普通手術(shù)室、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室潔凈區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房。
I、II類環(huán)境要求物體表面的細(xì)菌總數(shù)≤5 cfu/cm2。
III類環(huán)境：包括兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急診室、化驗(yàn)室、各類普通病室和房間，要求空氣中的細(xì)菌總數(shù)≤10 cfu/cm2。
IV類環(huán)境：包括傳染病科及病房。要求物體表面細(xì)菌總數(shù)≤15 cfu/cm2。
1、采樣時間:在消毒處理后進(jìn)行采樣。（或是在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣）
2、采樣面積：被采表面＜100/ cm2，取全部表面；被采表面>100 cm2，取100 cm2。小型物體表面的結(jié)果計(jì)算，用cfu/件表示。
3、采樣方法：
① 壓印采樣法：采用一直徑為5.6 cm（面積約為25 cm2）的消毒塑料專用平皿，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并使培養(yǎng)基高出平皿邊緣1-2mm,凝固后置4℃冰箱保存待用。采樣時將平皿上的瓊脂表面直接壓貼在被檢物體表面10-20秒后送檢。
置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-48小時，計(jì)算并鑒定細(xì)菌。
②用5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積>100 cm2，連續(xù)采樣4個，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子投入10 ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。
4、采樣結(jié)果計(jì)算方法：
物體表面細(xì)菌 平皿上菌落平均數(shù) ×采樣液稀釋倍數(shù)
菌落總數(shù)(cfu/cm2)＝─────────────────
采樣面積(cm2)
采樣液稀釋倍數(shù)為10：（棉拭子投入10 ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)）
5、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：
Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu∕cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。
Ⅲ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤10cfu∕cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。
Ⅳ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤15cfu∕cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。
母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、 新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門氏菌。
手和皮膚黏膜消毒：
1、采樣時間：在接觸病人和從事醫(yī)療活動前進(jìn)行采樣或消毒后立即采樣。
2、采樣面積及方法：
（1）手的采樣:被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面積約 30 cm2)，并轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入 10ml 含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。
（2）皮膚粘膜采樣：用5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10 ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。若表面不足5cm×5cm，可用相應(yīng)面積的規(guī)格板采樣。
3、檢測方法：將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，用無菌吸管吸取1ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內(nèi)加入已溶化的45℃～48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。
4、采樣結(jié)果計(jì)算方法：
平板上菌落的平均數(shù) ×采樣液 稀釋倍數(shù)
細(xì)菌總數(shù)(cfu/ cm2) ＝ ─────────────────────────
采樣面積(cm2)
其中采樣面積即為30×2。
5、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：
Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu∕cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。
Ⅲ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu∕cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。
Ⅳ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤15cfu∕cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。
母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門氏菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。
皮膚粘膜：參照手的衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。
醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：
1、 進(jìn)入人體無菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫(yī)療用品**無菌。
2、 接觸粘膜的醫(yī)療用品，細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu∕g或100 cm2，致病性微生物不得檢出。
3、 接觸皮膚的醫(yī)療用品，細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤200cfu∕g或100 cm2，致病性微生物不得檢出。
使用中消毒劑與無菌器械保存液衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：
1、 使用中消毒劑：細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100cfu∕ml，致病性微生物不得檢出。
2、 無菌器械保存液：**無菌。
